ИБК РАН
  

Поиск

Яндекс метрика

Яндекс.Метрика

Оптимизация ресурса

Баннеры

Лаборатория молекулярной физиологии клетки
Исследование сигнальных систем клеток методами вычислительной биофизики

Основные научные результаты

Работы выполнялись при финансовой поддержке РФФИ

Математическое моделирование лиганд-рецепторного взаимодействия

Молекулярное узнавание – это ключевой физический процесс, который обеспечивает избирательность и векторность в биологических процессах. В контексте проводимых в лаборатории исследований нами проводится анализ лиганд-рецепторного взаимодействия с использованием компьютерного моделирования. Этот подход позволяет глубже понимать суть фармакологических данных, устанавливаемых экспериментально, давая им описание на языке межмолекулярных взаимодействий. Потенциально эта методология может открыть путь к предсказанию биологической активности вновь синтезируемых соединений, что трудно переоценить при разработке лекарственных препаратов.

Моделирование меж- и внутримолекулярных взаимодействий базируется на ряде методов вычислительной биофизики, включая докинг и молекулярную динамику, используемые в наших исследованиях. Докинг - метод предсказания относительной пространственной конфигурации молекулы, наиболее энергетически выгодной в пространстве всех возможных пар конформаций, достижимых при образовании связи с другой молекулой. Метод молекулярной динамики (MD) заключается в представлении моделируемой системы (молекулы или комплекса молекул) в виде совокупности взаимодействующих атомов, временная эволюция которой под действием межатомных сил рассчитывается численным интегрированием ньютоновских уравнений движения. В результате таких расчетов получается траектория - временной ряд конформаций, последовательно принимаемых наблюдаемой системой. Применяя МД метод к паре лиганд-рецептор, можно визуально наблюдать, с какими участками рецептора взаимодействует молекула лиганда, анализировать, какие структурные элементы участвуют в образовании связи, оценивать энергию связи и многое другое.

С вычислительной точки зрения MD метод крайне ресурсоемок, и решение многоатомных задач нередко требует доступа к суперкомпьютеру. В качестве достаточно эффективной альтернативы мы применяем собственную вычислительную платформу для параллельных вычислений с использованием 7 видеокарт последнего поколения (Nvidia GeForce 2080) и программного обеспечение AMBER с функцией счета на графических процессорах. Это позволяет эффективно проводить молекулярно-динамическое моделирование систем в десятки и даже сотни тысяч атомов.

В качестве примера использования методов вычислительной биофизики для решения практических задач, ниже представлены результаты анализа неспецифических, т.е. не опосредованного PI3K киназой, эффектов PI3K ингибитора LY294002 на клеточные ответы на ацетилхолин. Как показало MD моделирование, LY294002 может напрямую взаимодействовать с рецептором М3, ингибируя его активность. На Рис.1А показан фрагмент (275-350 нс) эволюции взаимных конформаций М3 рецептора и молекулы LY294002, которая завершается связыванием данных молекул. Докинг этого связывания, представленный на Рис.9В, дает энергию связывания 8.4 ккал/моль.

рис1 2

Рисунок 1 Моделирование связывания М3 рецептора и LY294002. (А) Репрезентативные конформации М3 рецептора и молекулы LY294002 на одной из MD траекторий. (В) Образование водородной связи (желтый пунктир) с триптофаном 250 в месте связывания LY294002 с М3 рецептором.

Лаборатория молекулярной физиологии клетки
Реконструкция сигнальных процессов в модельных системах

Основные научные результаты

Работы выполнялись при финансовой поддержке РФФИ, РНФ, Министерства образования и науки РФ, фондами CRDF и HHMI, в рамках программ Президента РФ и Президиума РАН.

Клеточные и генетически-кодируемые сенсоры

Клеточные биосенсоры для анализа секреции сигнальных молекул

Во вкусовой почке идентифицированы множественные первичные медиаторы, которые, видимо, вовлечены в межклеточные коммуникации. Это ставит вопрос о том, какие типы вкусовых клеток распознают и секретируют ту или иную сигнальную молекулу. Для анализа секреции первичных медиаторов нами разрабатывался метод клеточного биосенсора. Суть этого подхода состоит в том, что для мониторинга сигнальной молекулы в экстраклеточном пространстве используются клетки, которые эндогенно или экзогенно экспрессируют молекулярный рецептор исследуемого соединения, сопряженный с мобилизацией Са2+. Локальный выброс сигнальной молекулы приводит к генерации Са2+ сигнала в клетке-сенсоре. В частности, для мониторинга секреции АТР использовались клетки линии COS-1 (Рис.1i), в которых функционируют метаботропные P2Y рецепторы.

рис1 1

Рисунок 1. Анализ секреции АТР вкусовыми клетками методом клеточного биосенсора. (i) Взаимное расположение вкусовой клетки типа II, активность которой регистрируется пэтч-электродом, и клеток АТР-сенсоров (COS-1), загруженных Са2+ зондом Fluo-4. Изображение получено в проходящем свете. (ii)- (iv) Флуоресцентное изображение той же группы клеток при различной поляризации вкусовой клетки. (ii) При -70 мВ на мембране вкусовой клетки уровень флуоресценции клеток АТР-сенсоров низок, свидетельствуя об отсутствие секреции АТР. (iii) Кратковременная (10 с) деполяризация вкусовой клетки до 20 мВ стимулировала выброс АТР, что приводило к повышение уровня Са2+ в АТР-сенсорах, который возвращался к исходному уровню после ее реполяризации вкусовой клетки (iv).

Для мониторинга секреции серотонина вкусовыми клетками типа III был клонирован рецептор 5-НТ2С и гетерологически экспрессирован в клетках линии CHO. Методами проточной цитофлуориметрии были получены клеточные моноклоны с высоким и постоянным уровнем экспрессии рецептора 5-НТ2С. С использованием микрофотометрии (Ca2+ imaging) были отобраны клоны с чувствительностью к внеклеточному серотонину порядка 1 нМ. Это позволило проанализировать закономерности секреции серотонина вкусовыми клетками (Рис.2).

рис2 1

Рисунок 2. Анализ секреции серотонина вкусовыми клетками типа III методом клеточного биосенсора. Вкусовая клетка поддерживалась при -70 мВ и периодически деполяризовалась в течении 2 с серией 10 мс импульсов до 0 мВ (верхняя панель). Нижняя панель, ответы клетки-сенсора, загруженной Са2+ зондом Fluo-4, на деполяризацию вкусовой клетки. Взаимное расположение вкусовой клетки типа III, активность которой контролировалась пэтч-электродом, и клеток-сенсоров как на Рис.1i.

Генетически-кодируемые сенсоры

Многие внешние стимулы мобилизуют внутриклеточный Са2+, поэтому Са2+ зонды и микрофотометрия (Ca2+ imaging) традиционно используются для исследования процессов трансдукции. Между тем, внутриклеточная сигнализация представляет собой весьма разветвленную систему сигнальных и регуляторных каскадов, взаимодействие между которыми невозможно однозначно восстановить путем мониторинга только одного параметра - внутриклеточного Са2+. Разработанные в последние годы генетически-кодируемые сенсоры внутриклеточных сигнальных молекул значительно расширяют возможности эксперимента. Нами начаты работы по созданию моноклональных клеточных линий, клетки которых экспрессируют в различных комбинациях множественные генетически-кодируемые сенсоры для одновременного мониторинга Са2+, cAMP, cGMP, IP3, PIP3. В частности, нами получены клоны клеток HEK-293, которые экспрессируют сенсор цитозольного Са2+ GEM-GECO1, флуоресцирующий в зеленой области, и сенсор ретикулярного Са2+ R-CEPIA1er, флуоресцирующий в красной области. Благодаря спектральному разнесению, эти генетически-кодируемые сенсоры обеспечивают возможность одновременного мониторинга цитозольного и ретикулярного Са2+ (Рис.3).

рис3 1

Рисунок 3. Ca2+-ответы клеток моноклональной линии GEM-GECO1/R-CEPIA1er. Репрезентативная регистрация Ca2+-сигналов, инициируемых ацетилхолином, в одиночной клетке, экспрессирующей сенсоры цитозольного и ретикулярного Са2+. Зеленая и красная кривые соответствуют одновременной регистрации флуоресценции GEM-GECO1 и R-CEPIA1er сенсоров, представленной как DF/F0, где F0 – средняя интенсивность флуоресценции в начальный момент регистрации. В случае R-CEPIA1er, DF= F-F0, F – текущая интенсивность флуоресценции. Поскольку флуоресценция GEM-GECO1 падает с повышением Са2+, для него DF= F0-F.

Лаборатория молекулярной физиологии клетки
Сигнальные процессы в клетках

Основные научные результаты

Работы выполнялись при финансовой поддержке РФФИ, РНФ, Министерства образования и науки РФ, фондами CRDF и HHMI, в рамках программ Президента РФ и Президиума РАН.

Молекулярные и клеточные механизмы вкуса

Периферическая вкусовая система обеспечивает мозг информацией для принятия жизненно важного решения о потреблении или избегании пищи. Функциональной единицей вкусовой системы млекопитающих является вкусовая почка – плотная группа из 50–80 клеток различного типа, включая вкусовые клетки типа I, II и III. Эти клетки отличаются морфологически, функционально и по спектру генов, вовлеченных в сенсорные функции. Исследование процессов вкусовой трансдукции и межклеточных коммуникаций во вкусовой почке является одним из основных направлений лаборатории. В последние годы в этой области были получены следующие основные результаты.

Неканоническая афферентная нейропередача вкусовых клеток типа II

Вкусовые клетки типа II являются основными хемосенсорными клетками, специализируюшимися на распознавании горьких и сладких соединений и аминокислот. Эти вкусовые клетки не формируют классические химические синапсы, и долгое время было не ясно, каким образом сенсорная информация передается этими клетками афферентному вкусовому нерву. В лаборатории были выполнены пионерские исследования по анализу молекулярной организации и принципов функционирования афферентного синапса в клетках типа II, который, как оказалось фундаментально отличаются от канонического синапса в других сенсорных клеток. У последних сенсорная информация кодируется путем секреции афферентного нейротрансмиттера глутамата с использованием Са2+-зависимого экзоцитоза. Вкусовые клетки типа II в ответ на вкусовую стимуляцию выбрасывают афферентный нейротрансмиттер АТР при участии АТР-проницаемых ионных каналов CALHM1. Локальный выброс АТР стимулирует P2X пуринорецепторы, функционирующие в окончания вкусового нерва (Рис.1).

рис1

Рисунок 1. Механизм вкусовой трансдукции в клетках типа II. Вкусовой GPCR-рецептор сопряжен G-белком с фосфолипазой Сb2 и IP3-зависимым выбросом депонированного Са2+. Вкусовая стимуляция инициирует повышение цитозольного Са2+, активацию Са2+-зависимого катионного канала TRPM5, с последующими деполяризацией, генерацией серии потенциалов действия (ПД) и выбросом АТР через потенциал-зависимый АТР-проницаемый канал CALHM1. Клетка типа I формирует экстраклеточный синаптический компартмент и предотвращает спиловер АТР, создавая диффузионный барьер и экспрессируя эктонуклеотидазу NTPD2.

Использование АТР-проницаемого ионного канала для секреции АТР ассоциируется с несколькими проблемами. Во-первых, для эффективного транспорта АТР пора такого канала должна иметь достаточно большой диаметр – 14 Å в случае CALHM1. Секреция АТР поэтому должна сопровождаться потерей таких метаболитов, как cAMP, IP3, NAD+, а также массированным входом внеклеточного Са2+, что чревато апоптозом. Кроме того, при физиологических градиентах поток АТР из клетки пропорционален концентрации АТР в окрестности устья АТР-проницаемого канала. Поскольку уровень АТР в клетке варьирует при изменении активности многочисленных АТР-аз, киназ и других АТР-зависимых ферментов, то высвобождаемый АТР должен быть компартментализован, чтобы афферентная нейропередача не зависела от клеточного метаболизма. Оказалось, что такой компартмент действительно существует. Клетки типа II содержат атипичную митохондрию, примыкающую к плазматической мембране в месте ее сопряжения с нервным окончанием (Рис.2А), где функционируют АТР-проницаемые каналы, собранные в кластер. Эта митохондрия образует внутриклеточный пресинаптический компартмент, который, создает физический барьер для диффузионного обмена с цитоплазмой, в котором, по-видимому, поддерживается не зависящий от остальной части клетки уровень секретируемого АТР (Рис.2Б).

рис2

Рисунок 2. Пресинаптический компартмент во вкусовых клетках типа II. (А) Электронно-микроскопическое изображение атипичной митохондрии со-локализованной с нервным окончанием. (Б) Схема организации афферентного синапса в клетке типа II. Кластер АТР-проницаемых каналов CALHM1 изолирован атипичной митохондрией, которая является источником секретируемого АТР и предотвращает перегрузку клетки Са2+ входящим через CALHM1. Здесь, Un – митохондриальный Са2+ унипортер, PMCA – Са2+-АТРаза плазмолеммы.

Потенциал-зависимость секреции АТР

Вкусовые клетки типа II электрически возбудимы, и потенциал действия (ПД) инициирует выброс нейротрансмиттера АТР. Между тем, другие сенсорные клетки, которые подобно вкусовым не имеют аксона (фоторецепторы, волосковые клетки органа Корти), электрически не возбудимы и используют градуальный рецепторный потенциал для регуляции секреции афферентного нейротрансмитера. В свете этого факта физиологическая целесообразность электрической возбудимости клеток типа II неясна. В качестве возможной причины нами рассматривались особенности синаптической передачи в клетках типа II, в частности, потенциал-зависимость секреции АТР. Последняя анализировалась экспериментально методом АТР-биосенсора и теоретически путем математического моделирования.

С использованием формализма Гольдмана-Ходжкина-Каца была разработана модель транспорта АТР через АТР-проницаемый канал и получены транспортные уравнения для анализа потенциал-зависимости выброса АТР через ионный канал CALHM1, характеризуемый медленной деактивацией. Последнее предопределяет разный тип потенциал-зависимости секреции АТР при короткой и длительной деполяризации клетки. Моделировался выброс АТР под действием короткого деполяризующего импульса, имитирующего потенциал действия, и под действием длительного импульса, как в случае градуального рецепторного потенциала. При реалистичных значениях параметров модель весьма точно описывала потенциал-зависимость выброса АТР при продолжительной (Рис.3А) и короткой (Рис.3В) электрической стимуляции. Следует отметить, что рецепторный потенциал, который генерируется в процессе вкусовой трансдукции за счет активации неселективных катионных каналов TRPM5, принципиально не может превышать 0 мВ. Характеризуемый резкой потенциалзависимостью CALHM1 обеспечивает заметный выход АТР только при деполяризации выше -10 мВ (Рис.3А). В силу этого, градуальный рецепторный потенциал является крайне неэффективным регулятором синаптической передачи, основанной на выбросе АТР, поскольку последний практически отсутствует в области от потенциала покоя -55 мВ до примерно -10 мВ (Рис.3А, оранжевая панель). Скорее всего, именно поэтому вкусовые клетки типа II генерируют потенциалы действия (ПД) (50-60 мВ), который обеспечивает надежный выброс АТР, превышая порог активации CALHM1 (Рис.3В). Кроме того, ПД придают квантовый характер секреции нейротрансмиттера, как в случае экзоцитозного механизма.

рис3

Рисунок 3. Потенциал-зависимый выброс АТР, детектируемый методом АТР-биосенсора. (А) Выброс АТР при деполяризации вкусовых клеток типа II 2х cекундными импульсами от поддерживаемого потенциала -70 мВ до 60 мВ с шагом 10 мВ. Символы – усредненные ответы АТР-биосенсора. Непрерывная кривая – расчетные данные, полученные на основе математической модели выброса АТР. (В) Выброс АТР при стимуляции клеток типа II 2х cекундной серией ПД-подобных импульсов (5 мс), варьируемых в пределах -60 ÷ 60 Мв.

Транскриптомный анализ, молекулярное клонирование и гетерологическая экспрессия сигнальных и канальных белков

Анализ экспрессии генов на уровне одиночных хемосенсорных клеток

Во многих тканях и органах популяция клеток гетерогенна и поэтому анализ транскриптома на уровне ткани не дает адекватную информацию о профиле экспрессии и коэкспрессии генов. Нами разработана методология анализа транскриптов генов в одиночных хемосенсорных клетках с использованием методов RNA амплификации и PCR с ген-специфичными праймерами (Рис. 4). В случае вкусовых клеток, которые не могут быть идентифицированы морфологически, разработаны физиологические критерии их идентификации с использованием методов patch clamp, Ca2+ imaging и трансгенных мышей. Проанализирован профиль экспрессии генов ряда рецепторных (T1R1-T1R3, CASR, GPRC6A), канальных (TRPM5, PKD2L1, Panx1, Cx 26 – Cx 45), сигнальных (gustducin, PLCb2) и других (SNAP-25, NTPD2) белков во вкусовых клетках, и изучено распределение транскриптов всех шести генов пероксиредоксинов на уровне одиночных обонятельных нейронов.

рис4

Рисунок 4. Методология транскриптомного анализа в одиночных клетках.

Пуринэргическая и холинергическая системы вкусовых клеток

Информационный процессинг во вкусовой почке обеспечивается межклеточными коммуникациями. Нами впервые показано, что таковые протекают при участии пуринергической и холинергической сигнальных систем. В частности, установлено, что вкусовые клетки экспрессируют множественные изоформы P2Y пуринорецепторов, включая P2Y1, P2Y2, P2Y4 и P2Y6, сопряженные с фосфоинозитидным каскадом, мобилизацией депонированного Са2+ и активацией Са2+-зависимых Cl- каналов. Получены биофизические и фармакологические свидетельства, что во вкусовых клетках P2Y2 и P2Y4 рецепторы формируют гомо- и гетеродимеры. Установлено, что субпопуляция вкусовых клеток типа I экспрессирует мускариновые рецепторы ацетилхолина (М1, М3 и М5 изоформы), сопряженные с фосфоинозитидным каскадом и мобилизацией Са2+.

Молекулярное клонирование и гетерологическая экспрессия

Для решения задач клеточной физиологии был клонирован ряд рецепторных (CASR, GPRC6A, 5-HT2C, P2Y11, PAR1) и канальных белков (TRPM5, TRPC2, PKD2L1, Panx1, P2X2, P2X3, TMEM16A, TMEM16B), которые затем гетерологически экспрессировались в клетках HEK-293 и/или CHO для дальнейшего анализа их функциональных, биофизических и фармакологических свойств.

Са2+ сигнализация в мезенхимных клетках

Мезенхимные стромальные клетки (МСК), идентифицированные в ряде тканей – это гетерогенная клеточная популяция, самоподдерживающаяся за счет пролиферации и способная к дифференцировке в клетки опорных и соединительных тканей. По свои специфическим и во многом уникальным биологическим свойствам МСК обладают большим терапевтическим потенциалом для регенеративной медицины.

рис5

Рисунок 5. Модель трансдукции агонистов в МСК. Связывание агониста с рецептором стимулирует продукцию DAG and IP3 за счет гидролиза PIP2 фосфолипазой С. Последующая активация специализированных IP3 рецепторов (IP3Rgrad) вызывает выброс Ca2+ и формирование локального Ca2+ сигнала, градуально зависящего от интенсивности стимуляции клетки (красная кривая). По достижению порогового уровня (пунктирная линия), локальный Са2+ сигнал стимулирует выброс Ca2+ из другого Ca2+ депо по механизму CICR. Это является основным механизмом усиления в каскаде трансдукции и обеспечивает генерацию глобального Ca2+ signalа (голубая кривая).

При исследовании рецепторных и сигнальных систем МСК из жировой ткани человека нами было показано, что агонисты ряда гептаспиральных рецепторов (G-protein coupled receptor, GPCR) способны мобилизовать Са2+ в этих клетках. Специфической особенностью исследованной нами адренергической и пуринергической трансдукции в МСК было то, что Са2+ ответы на агонисты генерировались по принципу «все или ничего». Иными словами, последовательные аппликации агонистов либо не вызывали мобилизацию внутриклеточного Са2+, либо инициировали импульсное повышение Са2+ практически до одной и той же величины при разных концентрациях выше пороговой. Ряд фактов свидетельствовал о том, что адренергическая и пуринергическая трансдукция, скорее всего, протекает в МСК в две стадии. Вначале генерируется локальный Са2+ сигнал, градуально зависящий от концентрации агониста, который затем инициирует Са2+ индуцированный выброс депонированного Са2+ (Са2+-induced Са2+ release, CICR). Последний является пороговым, триггер-подобным регенеративный процессом, который может приводить к генерации глобального Са2+ сигнала, амплитуда которого слабо зависит от величины первоначального инициирующего Са2+ сигнала (Рис.5). Предложенная модель объясняет феноменологию Са2+ сигнализации, инициируемую агонистами в МСК, и, по-видимому, соответствует функциям этих клеток. Их основную физиологическую задачу можно сформулировать как «пороговую» – эти клетки должны находиться в самоподдерживающемся неактивном состоянии в ожидании адекватного сигнала, по получении которого МСК мигрируют в место повреждения ткани и дифференцируются в клетки нужного фенотипа. В этом случае пороговый тип сигнализации позволяет отсечь шум и воздействия, неадекватные по величине и продолжительности.

Специфические взаимодействия между биологическими молекулами лежит в основе всех жизненно важных клеточных процессов, включая ферментативный катализ (фермент/субстрат), рецепцию (лиганд/рецептор), иммунный ответ (антитело/антиген), экспрессию генов (белок/нуклеиновая кислота). Поэтому одной из фундаментальных задач теоретической и вычислительной биологии является компьютерное моделирование таких взаимодействий, которое также важно для решения прикладных задач. В частности, моделирование взаимодействия лиганд-рецептор является эффективным инструментом для разработки новых лекарственных форм. Моделирование поверхностных взаимодействий способствует получению оптимальных методик иммобилизации ферментов на твердых подложках, что является  одной из задач биосенсорной технологии.

Взаимодействие белка опсина с хромофором ретиналем. Родопсин – это фоточувствительный белок, состоящий из белка опсина, ковалентно связанного с хромофором ретиналем. Поглощение кванта света ретиналем вызывает его изомеризацию из 11-cis в all-trans конформацию с последующим изменением конформации ряда аминокислотных остатков родопсина. Последнее приводит родопсин в активное состояние, в котором он стимулирует G-белок и сопряженную цепь химических реакций, в конечном счете приводящих к генерации электрического сигнала, что лежит в основе ответа  фоторецепторной клетки на свет. Активная конформация родопсина достигается в течении миллисекунд, поэтому экспериментальное исследование процессов, сопрягающего изомеризацию ретиналя с активацией родопсина весьма затруднительно. Нами моделировалось взаимодействие опсина с двумя изомерами ретиналя – 11-cis и all-trans – и находилось локальная структура, образованная аминокислотами из ближайшего микроокружения ретиналя. Рис.1  иллюстрирует расчетные конформации аминокислотных остатков, взаимодействующих с 11-cis ретиналем и изменения, вызванные изомеризацией хромофора.

Рис.1. Взаимодействие родопсина с  ретиналем.

Рис.1. Взаимодействие родопсина с  ретиналем. Розовый – 11-cis, голубой – all-trans изомеры ретиналя,  основная цепь и остаток ретиналь-связывающий остаток Lys306 окрашены в желтый цвет для 11-cis ретиналь-родопсина, в синий для 11trans.

БЕЛОК-БЕЛКОВОЕ УЗНАВАНИЕ НА ПРИМЕРЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЦИТОХРОМА Р450 С БЕЛКОМ -  ПЕРЕНОСЧИКОМ ЭЛЕКТРОНА.

В метаболизме многих веществ цитохромы Р450 ответственны за окисление  лекарств и стероидов у человека, а бактериальные цитохромы  P450 – за синтез собственного строительного материала, также путем окисления органических веществ. Для этого цитохромам  P450 необходим электрон, поставляемый отрицательно заряженным белком-переносчиком электрона. Нами было выяснено, что электростатическое поле цитохромов Р450 различных биологических видов (как бактерий, так и млекопитающих) имеют область положительного потенциала, комплиментарную отрицательному потенциалу белка-переносчика. Наличие и величина этой области можно рассматривать как консервативное свойство цитохромов  P450, поскольку  оно характерно для всех исследованных цитохромов  Р450 вне зависимости от степени гомологичности их аминокислотной последовательности. Такие области показаны на рисунке для трех весьма различных (идентичность аминокислотных последовательностей около 20%) цитохромов Р450. Таким образом, для всех цитохромов P450 была теоретически идентифицирована область их поверхности, ответственная за молекулярное узнавание белка-переносчика электрона.

Рис.1. Электростатический потенциал цитохромов холестерин-метаболизирующего цитохрома P450 человека (слева), цитохрома Р450 ...

Рис.1. Электростатический потенциал цитохромов холестерин-метаболизирующего цитохрома P450 человека (слева), цитохрома Р450 – монооксигеназы жирных кислот из Ваcillus megaterium (в центре) и человеческого цитохрома P450 – гидролазы прогестерона (справа). Синий цвет – положительный потенциал, красный – отрицательный, белый – нейтральный.